国外，根据对动物进行的一系列结构活性研究和毒性反应研究，通常会对氢叶酸类似物等，选作进一步临床试验，有证据表明它在结肠癌中，显不出临床活性。雷替曲基主要靶定TS，也是DHFR和GARFT的强效抑制物。
 

有趣的是，雷替曲塞比甲氨蝶呤更具有前体药物的特点，因为多聚谷氨酸化可以增加药物的细胞毒性；在一项I期临床试验中，18例儿童患者中观察到药物的活性。而在m期临床试验中，成年患者中，却观察到了药物对结肠癌的活性。

雷替曲塞已经在欧洲和加拿大注册，可用于治疗结肠癌。然而，因为在3项III期临床研究的一项研究中，药物的效果并不优于5-FU/LV，因此未能获得FDA的批准。而ZD9331是TS的一种新型的非多聚谷氨酸化叶酸拮抗剂抑制剂，和雷替曲塞相同，它可以与叶酸受体a高亲和力地结合。

这种情况表明，可以在高度表达其受体的肿瘤中增加药物活性。尽管起初作为一种多靶点叶酸拮抗剂，但该药物主要是一种TS抑制剂，因为它对该酶的亲和性较高，所以相关产品抑制性实验也是如此。

针对多聚谷氨酸，通常它是培美曲塞抑制TS和GARFT的必需物质，但抑制DHFR时则不必要。培美曲塞可以由FPGS快速多聚谷氨酸化，酶的Km数值也低于甲氨蝶呤两个数量级；与甲氨蝶呤不同，培美曲塞是质子-偶联叶酸转运子和RFC两者的底物，当提示单独损失RFC时并不会导致耐药性。